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豬藍耳病毒PCR檢測的前處理步驟有哪些

更新日期: 2025-10-28
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豬藍耳病毒(PRRS)檢測試劑盒用于檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中豬藍耳病毒(PRRS)的濃度。
【實驗原理】
應用雙抗原夾心法測定標本中指標表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中指標相結合,經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)與待測樣品中豬藍耳病毒(PRRS)濃度呈正相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中豬藍耳病毒(PRRS)的濃度。
豬藍耳病毒(PRRSV)PCR檢測的前處理步驟主要包括樣本采集、保存及核酸提取:
樣本采集‌:
‌組織樣本‌:優(yōu)先采集肺臟、扁桃體、淋巴結等含毒量高的組織,活體剖檢時需無菌操作,每份組織單獨封裝‌。
‌血液/血清‌:前腔靜脈采血3-5ml,凝固后2-8℃冷藏(≤3天)或-20℃冷凍(≤30天),避免溶血‌。
‌其他樣本‌:如口腔液、閹割睪丸液、死胎舌頭等,需注意避免環(huán)境污染。
樣本保存與運輸‌:
‌短期保存‌:2-8℃冷藏(≤72小時),長期需-70℃冷凍,避免反復凍融(≤3次)‌。
‌運輸條件‌:加冰密封,維持低溫狀態(tài)。
核酸提取‌:
‌組織處理‌:稱取2g組織加入PBS研磨,反復凍融3次裂解細胞。
‌裂解與純化‌:使用TRIzol法提取RNA,加入氯仿-異戊醇抽提,異丙醇沉淀后75%乙醇洗滌,DEPC水溶解‌。
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